همسانه سازی، بیان و تخلیص انتهای کربوکسیل زیرواحد c آنزیم اوره آز هلیکوباکتر پیلوری به منظور تولیدigy در زرده تخم مرغ

سابقه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری (h.pylori) نوعی باکتری گرم منفی اسپیرال و میکروآیروفیل است که در لایه مخاطی معده انسان تکثیر و ایجاد عفونت می نماید. رویکردهای جدید در جهت بکارگیری درمان های اختصاصی نظیر ایمنوتراپی برای ریشه کنی این عفونت میباشند. آنزیم اوره آز یکی از مهمترین عوامل بیماری زا و آنتی ژنیک این باکتری است. روش بررسی: دراین مطالعه تجربی، ابتدا بخش انتهای کربوکسیل زیر واحد c اوره آز، پس از تخلیص ژنوم باکتری، با کمک واکنش زنجیره پلیمراز (pcr) تکثیر شده و محصول روی ناقل بیانی pet28a کلون شد. پروتئین نوترکیب پس از تراریخت سازه نوترکیب به باکتری e.coli سوش bl21de3 بیان شد و نتایج با استفاده از sds-page تحلیل و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون ni-nta تخلیص شد. پروتئین نوترکیب تخلیص شده، به مرغ لگهورن سفید تزریق و igy با روش استون/کلروفرم تخلیص و با روش elisa و sds-page مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: با تعیین توالی سازه نوترکیب، صحت انجام همسانه سازی تأیید شد. بررسی با sds-page نشان داد پروتئین نوترکیب rurecc به خوبی بیان و تخلیص شده است. همچنین نتایج الایزا ایمن زایی بالای این پروتئین نوترکیب را نشان داد. نتیجه گیری: تولید پروتئین نوترکیب rurecc هلیکوباکتر پیلوری در e.coli به عنوان سلول میزبان، امکان دسترسی آسان به آنتی-ژن را فراهم کرد. علیرغم کوچک بودن آنتی ژن نوترکیب، توانایی ایمنی زایی آن شبیه به کل زیر واحد c اوره آز است